Östlich der Dreifaltigkeitskathedrale befindet sich die Schutzherrin-Kirche. Sie wurde auf der Grundlage einer kleinen Hauskirche des Großfürsten-Treue-Tempels erbaut, der einen hohen Unterbau mit tiefen gewölbten Kellern hatte. Wie andere Kirchen der Alexandrow-Sloboda aus dem frühen 16. Jahrhundert wurde die Kirche aus Ziegeln und weißem Stein errichtet. Der gedrungene Ziegel-Turm, der als Vorbild für alle nachfolgenden Turm-Kirchen gilt, war mit Schindeln gedeckt. Der Altar und der Turm wurden in den 70er Jahren des 16. Jahrhunderts bemalt, und ein Teil der Fresken ist bis heute erhalten geblieben. Die Eingangsportale aus weißem Stein waren mit eleganten Schnitzereien verziert. An die Kirche schlossen sich die Paläste mit Kellern an. Im Jahr 1680, als die Pfarrei der Dreifaltigkeitskirche ohne Geistliche blieb, wurden die Gottesdienste dort eingestellt. Auf Befehl von Zar Theodor Alexejewitsch und mit dem Segen von Patriarch Joakim wurde die Kirche dem Uspenski-Mädchenkloster übergeben mit dem Auftrag, den Altar zu erweitern, eine Kapelle zu Ehren des heiligen Märtyrers Theodor Stratilates zu bauen und eine warme Speisehalle einzurichten. In den Jahren 1680-1681 fanden im Kloster und in der Dreifaltigkeitskirche umfangreiche Bauarbeiten statt, für die der Zar mindestens 700 Rubel aus der Staatskasse bereitstellte. Die Arbeiten wurden von Schreibkräften aus Moskau sowie von Handwerkern des Großen Palastes und anderen Meistern geleitet. Ab Juni 1681 war der Diakon Semjon Kudrjawzew aus dem Dreifaltigkeits-Sergius-Kloster mit dem Bau des Uspenski-Mädchenklosters beschäftigt.

An den Bauarbeiten waren viele Meister beteiligt: Steinmetze und Zimmerleute aus Moskau, dem Dreifaltigkeits-Sergius-Kloster, Jaroslawl, Susdal und anderen Orten. Die Stadtbewohner von Alexandrow und der Umgebung beschafften weißen und Bruchstein, produzierten Kalk und Ziegel. An den Speisebereich der Kirche wurden weiße Steintreppen mit Vorhallen angebaut, ein Turmvorbau von Süden und ein Vorbau mit Durchgangsfluren von Norden sowie ein dritter Vorbau unter dem Glockenturm von Westen. Die Dächer waren bis zum frühen 19. Jahrhundert mit Schindeln gedeckt, die Fenster hatten Mica-Einsätze, und im Erdgeschoss standen schmiedeeiserne Gitter. Drei Eichenkreuze auf der Kirche waren mit Eisen beschlagen, der Boden im Speisebereich war mit Eichenziegeln ausgelegt und mit Wachs poliert. Für die Heizung wurden drei Öfen installiert, die mit weißen und grünen Fliesen verziert waren.

Im Westen wurde ein steinerner Glockenturm im typischen Stil des 17. Jahrhunderts mit vier Etagen und einem achteckigen Glockenstuhl mit einem Turmoberteil angebaut. Im Glockenturm wurden 9 Glocken und eine Uhr untergebracht, die als „schlagende russische Eisen-Uhr“ bezeichnet wurde und die Zeit nach Sonnenaufgang und -untergang maß. Neben dem Glockenturm befand sich eine Zelle für die Nonnen, die die Stunden zählten. Im unteren Stockwerk unter der Kirche befanden sich die Speisehalle, die Küche und die Backstube sowie Zellen für die Nonnen.

Nach der Umgestaltung im Jahr 1682 wurde die Kirche in die Schutzherrin der Heiligen Gottesmutter umgeweiht. In der Kapelle wurde eine Sakristei eingerichtet, da zu Ehren des heiligen Märtyrers Theodor Stratilates eine separate Kirche geweiht wurde. Der Archimandrit Leonid Kavelin, der das Uspenski-Kloster Ende des 19. Jahrhunderts beschrieb, bemerkte, dass die Schutzherrin-Kirche im Winter für die täglichen Gottesdienste der Nonnen diente, dank der bequemen Speisehalle. Für den Komfort der älteren Äbtissin und der Nonnen wurde ein überdachter Holzgang gebaut, der die Kirche mit dem Äbtissinnenhaus verband.

Vom 18. Jahrhundert bis zum frühen 20. Jahrhundert wurden in der Schutzherrin-Kirche mehrfach Renovierungsarbeiten durchgeführt und die Ikonostasen erneuert. In den 60er Jahren des 19. Jahrhunderts wurden die Wände des Speisebereichs mit Malerei geschmückt. Im März 1922 wurden die wertvollen Verkleidungen und Gewänder von Ikonen zur Hilfe für die Hungernden beschlagnahmt, und im April wurden die wertvollsten Gewänder, Basmenrahmen und Ikonen des 17.-18. Jahrhunderts in die Museumsbestände übergeben. Anfang 1923 wurde die Schutzherrin-Kirche, wie auch andere Kirchen des Klosters, geschlossen. Heute befindet sich im Tempel eine ständige Ausstellung des Museums „Alexandrowska Sloboda“.