Одним из значимых исторических мест Ростова-на-Дону является дореволюционный храм Преполовения Пятидесятницы, который в годы Гражданской войны стал одним из центров обороны города от большевиков.

Первое упоминание о храме относится к 1824-1829 годам, когда на средства местных жителей был построен первый каменный Преполовенский храм в казачьей станице Нижне-Гниловской. Строительство длилось пять лет, и в 1829 году храм был освящен в честь Воскресения Христова. Позже, по просьбе прихожан и с благословения епископа Воронежского и Черкасского Епифания, престольный праздник был перенесен на Преполовение Пятидесятницы, и церковь стала называться Преполовенской. Храм стал центром духовной жизни местных жителей.

Примерно через 40 лет после освящения храм получил звонницу над притвором. Вскоре рядом появились сторожка и канцелярия. С 1823 года при церкви работало мужское училище, а с 1878 года, начальное женское училище. В церковный причт входили священник и псаломщик, которые жили на подаяния и помогали обучать детей грамоте.

В те времена часто вспыхивали эпидемии холеры, и Ростов-на-Дону с прилегающими станицами не был исключением. Верующие считали, что одним из средств против эпидемии была Аксайская икона Божией Матери, Одигитрия. В 1892 и 1893 годах, в знак избавления от холеры и для предотвращения новых вспышек, при храме была построена часовня в честь Чудотворной Аксайской иконы Божией Матери Одигитрии. Во время эпидемии люди активно посещали богослужения и молились с удвоенным усердием.

В 1908 и 1909 годах в храме были построены два новых придела: левый, северный, освящен в честь святителя Алексия, митрополита Киевского, а правый, южный, в честь Смоленской иконы Божией Матери, Одигитрии. Вскоре была возведена высокая звонница, а интерьер храма украсили росписи с изображениями святых и библейскими сюжетами. С 1898 года при храме начала работать церковноприходская школа. Причт увеличился до двух священников, диакона и двух псаломщиков. Количество прихожан также возросло, но впереди ожидали потрясения.

В 1917 году в России произошли два переворота, и в декабре город впервые ненадолго захватили большевики. В феврале 1918 года, после смерти атамана Каледина, Добровольческая армия генерала Корнилова покинула город и отправилась в Первый Кубанский Ледяной поход. Настоятель храма Алексей Часовников остался в Ростове и организовал сопротивление большевикам, сделав храм центром неповиновения.

После возвращения казачьих и добровольческих частей приход возобновил свою жизнь, но в январе 1920 года Ростов-на-Дону окончательно захватили большевики. Новая власть начала преследовать христианские приходы. Храм был ограблен и в 1933 году закрыт, а затем разрушен.

После разрушения храма его звонница использовалась для парашютных прыжков. В 1942 году, с приходом немецких и казачьих частей, в подвале разрушенного храма возобновились богослужения. В 1959 году советская власть окончательно ликвидировала приход, а церковное имущество передали государству. Формальным поводом для выселения христиан стало строительство железнодорожной станции, которое так и не началось. Место храма отдали угольному складу, а в здании бывшей школы устроили кинотеатр «Мир», который просуществовал до возрождения казачества и православия.

В 1991 году казачья община потребовала закрыть кинотеатр и вернуть здание приходу, что вскоре и произошло. В том же году у храма появился настоятель Алексий, а в 1996 году началось его восстановление. В 1999 году в недостроенном храме начались богослужения. Усилиями первого настоятеля были организованы музыкальная и общеобразовательная школы. Сейчас в храме хранятся мощи преподобного Амвросия Охтинского и Игнатия Брячанинова, а само здание окружено оградой, рядом находится источник и памятный крест казакам.

Настоятелем прихода является иерей Антоний, сын первого настоятеля храма Алексия. За свои труды он награжден медалью Священномученика Николая пресвитера 1-й степени.