El monasterio está ubicado en el centro del antiguo asentamiento de Pereyaslav, al norte de la ciudadela. Entre 1695 y 1700 se construyó aquí la catedral de piedra de la Ascensión del Señor, financiada por el hetman Iván Mazepa. Alrededor de la catedral se levantaron edificios de madera, que juntos formaron un conjunto arquitectónico del nuevo monasterio masculino. En 1700, tras la restauración de la sede episcopal que existió en la época de la Rus de Kiev, el monasterio de la Ascensión se convirtió en la residencia del arzobispo en funciones, lo que contribuyó a la formación de un nuevo centro de la ciudad. Hasta 1733 y desde 1785, el obispo de Pereyaslav sirvió como vicario del Metropolitano de Kiev, y entre estas fechas fue arzobispo de una diócesis independiente que incluía no solo Pereyaslav, sino también a la población ortodoxa de la Ucrania de la margen derecha, que permaneció bajo el dominio católico polaco hasta finales del siglo XVIII. Entre 1785 y 1793, la ciudad de Slutsk fue temporalmente el centro de la diócesis, en 1799 fue renombrada a Maloruso-Pereyaslav, en 1803 a Poltavo-Pereyaslav, y en 1847 la sede fue trasladada a Poltava. Hasta principios del siglo XX, Pereyaslav formaba parte de Poltavshchina. En 1816, el personal del monasterio fue trasladado a Saratov, después de lo cual la comunidad de la Ascensión se consideró fuera de servicio, y en 1847 fue asignada a la Casa Arzobispal de Poltava.

En 1701, Mazepa donó al monasterio el Evangelio de Peresopnitsa, ante el cual prestan juramento los presidentes de Ucrania. Este libro manuscrito, conocido por su decoración artística, contiene la primera traducción conocida del Evangelio canónico al idioma ucraniano. El Evangelio fue creado en Volinia: parte del manuscrito fue realizada en 1556 en el monasterio femenino de la Corte cerca de Iziaslav, y otra parte, en 1561 en el monasterio masculino de Peresopnitsa en Rivne. El trabajo en el libro fue financiado por la princesa Anastasia Zaslavska-Olshanska, quien tomó el hábito con el nombre de Paraskeva. En la década de 1830, el filólogo Iosif Bodiansky descubrió el libro en la biblioteca del seminario de Pereyaslav, a partir de cuyas publicaciones comenzó el estudio científico del Evangelio de Peresopnitsa como un destacado monumento de la literatura espiritual de Ucrania. Tras la reubicación del seminario a Poltava, el libro dejó Pereyaslav y posteriormente se guardó en el Museo Histórico y Local de Poltava, y después de la guerra, en el museo-reserva de la Lavra de las Cuevas de Kiev, desde donde fue transferido a la Biblioteca Nacional de Ucrania nombrada en honor a Volodymyr Vernadsky.

Desde 1738, funcionó un Colegio en el monasterio, una de las escuelas superiores de Ucrania del siglo XVIII, abierta por el obispo de Pereyaslav, Arseniy Berlo. La educación en el Colegio estaba disponible para todas las clases sociales, comenzaba a los 11 años y duraba de 11 a 12 años. Aproximadamente la mitad de los estudiantes eran de familias de bajos ingresos y vivían en la residencia a expensas de la diócesis. En los grados inferiores se enseñaban los idiomas eclesiásticos eslavón, latín y griego, catecismo, fundamentos de la fe cristiana, aritmética y geografía. En los grados medios se enseñaban poética y retórica, y en los superiores, filosofía y teología. Entre 1753 y 1754, el filósofo ucraniano Hryhoriy Skovoroda enseñó poética en el Colegio. En 1776, el Colegio fue transformado en seminario espiritual, que en 1862 fue trasladado a Poltava. Inicialmente, el Colegio se ubicaba en una casa de madera, que se quemó en 1748, después de lo cual las clases se trasladaron a una casa privada vacía. Entre 1753 y 1757 se construyó el edificio de piedra del Colegio, que existe hasta hoy. Desde 1862, aquí funcionó una escuela espiritual, y en 1972 se abrió el Museo Memorial de Hryhoriy Skovoroda.

El 4 de octubre de 1766, fue enterrado en la catedral de la Ascensión el jefe del santo mártir Daniil Kushnir, anciano de la iglesia de la Asunción del pueblo de Mliiv, ejecutado por devolver el templo a la Ortodoxia. La veneración de su memoria comenzó inmediatamente después de su muerte, y en 1994, el Sínodo Sagrado de la UPC lo canonizó, estableciendo la celebración el 11 de agosto. Desde 1786, en la catedral se encontraban las reliquias del venerable mártir Macario de Ovruch y Kaniv, asesinado por los turcos en 1678. En 1942, las reliquias fueron trasladadas a Cherkasy, y la memoria de Macario se celebra el 7 de septiembre y el 13 de mayo.

Desde principios de la década de 1920, la catedral de la Ascensión perteneció a la UAPC, en 1925, el territorio del monasterio fue ocupado por una unidad militar, y a principios de la década de 1930, el templo se convirtió en un almacén de granos. Durante la guerra, la catedral perdió su cúpula y aparecieron grietas en las paredes. En 1946, los edificios del monasterio fueron reconocidos como monumentos arquitectónicos de importancia nacional. Entre 1954 y 1964, la catedral fue restaurada, pero las pinturas fueron blanqueadas, y se utilizó como almacén. En la campanario se instaló una torre de agua. En 1955, se estableció una zona de protección del monumento, pero parte del territorio quedó en manos de los militares. En 1972, se abrió el Museo Memorial de Hryhoriy Skovoroda en el edificio del Colegio, y en 1975 se inauguró en la catedral el Museo-Diorama, dedicado a la cruzada del Dnipro por las tropas soviéticas en 1943. Desde 1978, se llevó a cabo la construcción de un nuevo Museo Histórico, pero el proyecto no se completó debido a la falta de financiación. En 2002, comenzó el proceso de transferencia del territorio de la unidad militar al Reserva Nacional de Historia y Etnografía "Pereyaslav". A finales de la década de 1990, se registró una comunidad de la UPC KP en la catedral, cuyos miembros se reunían en un local especialmente equipado, más tarde, en el campanario. Para que la resurrección de la santidad se llevara a cabo dentro de la Iglesia canónica, el 10 de febrero de 2011, el Sínodo Sagrado de la UPC bendijo la apertura del monasterio masculino de la Ascensión.