La Iglesia de la Anunciación de la Santísima Virgen fue construida en 1748 en el lugar donde, tres años antes, se había incendiado una iglesia de madera dedicada a la imagen de la Virgen de Kazán. El nuevo templo de piedra cálido fue erigido con el apoyo de los comerciantes moscovitas Shchelyagins. El suelo de mosaico fue creado a finales del siglo XIX con fondos de los feligreses, la mayoría de los cuales trabajaba en la manufactura de Kuznetsov en Pereslavl. En las paredes internas y en las bóvedas se conservaron pinturas que fueron descubiertas bajo una capa de cal durante la restauración en 1999. Los artistas restauradores de San Petersburgo las limpiaron, reforzaron y restauraron. La cúpula cónica de la iglesia de la Anunciación, al igual que la cúpula de la iglesia de San Pedro y San Pablo, construida al mismo tiempo, se eleva hacia arriba y tiene un tambor alto y estrecho con una pequeña cabeza. En las esquinas del cuadrado se encuentran tambores de tamaño ligeramente menor con cabezas similares.

En 1900, se añadió una iglesia lateral dedicada a la Presentación del Señor al edificio principal. La razón de esto fue que el pequeño espacio del templo no podía albergar a todos los peregrinos, ya que los habitantes de Pereslavl comenzaron a visitar masivamente el monasterio de Nicolás, a pesar de su ubicación en un pantano y la dificultad de acceso debido a los caminos erosionados en otoño y las nevadas en invierno. Ese mismo año, con fondos de benefactores, se construyó un sacristía de dos pisos en el lado sur del templo. En 1902 se consagró una nueva iglesia lateral en honor a Todos los Santos y se construyó un edificio de celdas de piedra de dos pisos adyacente al templo.

La iglesia de la Anunciación fue cerrada en la década de 1930. Las cúpulas fueron destruidas y el espacio de la antigua iglesia se convirtió en vivienda. Tras el regreso del monasterio a la Iglesia Ortodoxa Rusa, se realizó una renovación capital en la iglesia de la Anunciación. Con fondos del benefactor Viktor Ivanovich Tyryshkin, se instaló un iconostasio dorado de cuatro filas, adornado con tallas. Las íconos para el iconostasio fueron pintadas por graduados de la escuela de iconografía en el Monasterio de la Trinidad de San Sergio. En el templo reposan actualmente las reliquias del santo de Pereslavl, el venerable Cornelio el Silencioso, así como se encuentra la Cruz de Korsun, entregada solemnemente al monasterio el 12 de junio de 2010 desde el museo de Pereslavl.