В настоящее время храм является хранителем главной святыни русского народа и российского государства, Чудотворного Образа Владимирской Пресвятой Богородицы. С 1851 года участок храма Святителя Николая Угодника в Толмачах стал соседствовать с усадьбой П.М. Третьякова, московского купца и основателя Третьяковской галереи, который в 1856 и 1858 годах финансировал значительные работы в храме.

Чудотворный Образ Владимирской Пресвятой Богородицы был перенесен из Владимира в Москву в 1395 году во время нашествия Тимура (Тамерлана) на Северо-Восточную Русь. Благодаря заступничеству Образа, Русь избежала разгрома: дойдя до реки Оки, Тимур повернул обратно в Среднюю Азию. Образ был установлен в Успенском соборе Московского Кремля и оставался там до 1918 года, когда его передали в Исторический музей, а в 1927 году, в Третьяковскую галерею. Сейчас Образ находится в храме Святителя Николая Угодника в Толмачах, где его можно увидеть и поклониться. Он хранится в специальном киоте с музейной системой контроля условий, за чем следят сотрудники Третьяковской галереи.

Храм Святителя Николая Угодника в Толмачах, значимый памятник истории и культуры Москвы. Он расположен в Замоскворечье, районе, который в прошлом был местом проживания иноверцев и переводчиков, что отразилось в его названии. Замоскворечье стало торговым центром, о чем напоминает улица Пятницкая, названная в честь снесенного храма Параскевы Пятницы. Появление здесь храма Святителя Николая, покровителя путешественников, было естественным.

Храм впервые упоминается в 1625 году, но, вероятно, существовал и раньше, поскольку плотное заселение Замоскворечья началось после Смуты начала XVII века. Современный комплекс храма включает две основные части: трапезную с колокольней 1833-1834 годов и сам храм 1690-1697 годов.

Здание храма было построено в 1690-1697 годах и посвящено Сошествию Святого Духа. Оно представляет собой пример московского храмового строительства конца XVII века. Комплекс храма, включающий колокольню, трапезную и основной объем, был организован по единой оси, что создавало гармоничную градостроительную композицию.

Храм сильно пострадал в 1812 году, и к концу 1820-х годов его колокольня накренилась, что потребовало перестройки. Основное здание храма сохранило свою архитектуру с вертикальным объемом и симметричными рядами проемов. В 1832-1833 годах под руководством архитектора Ф.М. Шестакова были пристроены новые трапезная и колокольня. Эти части храма стали примером московского ампира.

В 1856 и 1858 годах на средства П.М. Третьякова и братьев Медынцевых в храме были проведены значительные работы, в результате которых он приобрел исторический внутренний облик, сохранившийся до его закрытия в 1929 году. Тогда же было выполнено оформление пределов трапезной и расписан храм.

В 1929 году храм был закрыт и передан Третьяковской галерее. В 1993 году здание вновь стало храмом, и в 1997 году была проведена его полная реставрация с восстановлением исторического облика. Поддерживающие работы проводятся регулярно.